安捷伦高效液相色谱仪的规范操作
1. 目的：明确安捷伦高效液相色谱仪的规范操作，确保数据的准确性。
2. 范围：适用于安捷伦高效液相色谱仪。
3. 职责：检验人员对此负责。
4. 操作规程：
4.1 系统组成
本系统由1个溶剂二元输送泵（分主/A泵和副/B泵）、手动进样阀、柱温箱、检测器、化学工作站和电脑等组成。
4.2 准备
4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。
4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。
4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。
4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常
4.1 将待测样品按要求前处理，准备HPLC 所需流动相，检查线路是否连接完好，废液瓶是否够用等。
4.3开机：
4.3.1 打开计算机,进入中文Windows XP画面,并运行CAG Bootp Server程序。
4.3.2 打开 1200 LC 各�？榈缭�。
4.3.3 待各�？樽约焱瓿珊�，双击[Instrument 1 Online]图标，化学工作站自动与1200LC通讯，进入的工作站画面如下所示。
4.3.4 从[视图]菜单中选择[方法和运行控制]画面, 点击[视图]菜单中的[显示顶部工具栏]， [ 显示状态工具栏]，[系统视图],[样品视图]，使其命令前有[√]标志，来调用所需的界面。
4.3.5 把流动相放入溶剂瓶中。
4.3.6 打开冲洗阀。
4.3.7 点击[泵]图标，点击[设置泵…]选项，进入泵编辑画面。
4.3.8 设流速：5ml/min，点击[确定]。
4.3.9 点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[启动]，点击[确定] ，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。
4.3.10 点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[关闭]，点击[确定]关泵， 关闭冲洗阀。
4.3.11 点击[泵]图标，点击 [设置泵…选项]，设流速：1.0ml/min。
4.3.12 点击泵下面的瓶图标，如下图所示（以单元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。 也可输入停泵的体积，点击[确定]。
4.4 数据采集方法编辑
4.4.1开始编辑完整方法：从[方法]菜单中选择[编辑完整方法…] 项，如下图所示选中除[数据分析 ]外的三项，点击[确定]，进入下一画面。
4.4.2方法信息
4.4.2.1在[方法注释]中加入方法的信息（如：测试方法）。
4.4.2.2 点击 [确定]， 进入下一画面。
4.4.3 泵参数设定
4.4.3.1 在[流速]处输入流量,如1ml/min，在[溶剂 B]处输入80.0,(A=100-B) ,也可[插入 ]一行[时间表] ,编辑梯度。在[压力限]处输入柱子的最大耐高压，以�；ぶ�。
4.4.3.2 点击[确定]，进入下一画面。
4.4.4 柱温箱参数设定
4.4.4.1 在[温度]下面的空白方框内输入所需温度,如：40度。并选中它,点击[更多>>] 键,如图所示,选中[与左侧相同]，使柱温箱的温度左右一致。
4.4.4.2 点击[确定]，进入下一画面。
4.4.5 检测器参数设定：检测波长：一般选择最大吸收处的波长。样品带宽：一般选择最大吸收值一半处的整个宽度
参比波长：一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域 。
参比带宽：至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用100nm作为缺省值。同时可以输入采集光谱方式，步长，范围，阈值。选中所用的灯。
4.4.6 在[ 运行时选项表 ]中选中[ 数据采集]，点击[确定]。
4.4.7 点击[方法]菜单，选中[方法另存为…]，输入一方法名，如[测试]，点击[确定]。
4.4.8 从菜单 [视图]中选中[在线信号],选中[信号窗口1],然后点击[改变…] 钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击[确定]。(如同时检测二个信号,则重复10,选中[信号窗口2]。单击[改变]键，即可弹出右侧的[编辑信号图谱]窗口，进而选择所需的谱图信号。
4.4.9 从[运行控制]菜单中选择[样品信息]选项，如下图所示，输入操作者名称，如[安装工程师]；在[数据文件 ]中选择[手动]或[前缀/计数器]。区别: 手动--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。 Pr—在前缀/计数器----[前缀]框中输入前缀，在[计数器]框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd数据0001，vwd数据0002……。
4.4.10 点击[确定] ,从[仪器] 菜单选择[系统开启]。
4.4.11 等仪器准备好，基线平稳，用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。
4.5 数据分析方法编辑:
4.5.1 从[视图]菜单中，点击[数据分析]进入数据分析画面。
4.5.2 从[文件]菜单选择[调用信号]，选中您的数据文件名，如下图所示。点击[ 确定]，则数据被调出。
4.5.3做谱图优化：从[图形]菜单中选择[信号选项]，如下图所示。从[范围] 中选择[满量程] 或[自动量程] 及合适的时间范围或选择[自定义量程] 调整。反复进行，直到图的比例合适为止。点击[ 确定]。
4.6积分:
4.6.1 从[积分]菜单中选择[积分事件]选项，如下图所示。选择合适的[斜率灵敏度]，[峰宽]，[最小峰面积]，[最小峰高]。
4.6.2 从[积分]菜单中选择[积分]选项， 则数据被积分。
4.6.3如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。
4.6.4点击左边[√]图标，将积分参数存入方法。
4.7打印报告:
4.7.1从[报告]菜单中选择[设定报告]选项，进入如下图所示画面。
4.7.2 点击[定量结果]框中[计算]右侧的黑三角，选中[面积百分比]，其它选项不变。
4.7.3 点击[ 确定]。
4.7.4 从[报告]菜单中选择[打印报告]，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则点击[报告] 底部的[打印]钮。
4.8关机:关机前，先关灯，用相应的溶剂充分冲洗系统。退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机。关闭Agilent 1200各�？榈缭纯�。
4.9. 液相色谱日常维护
4.9.1. 贮液器
清洁是保持流动相贮液器正常使用的关键，要尽可能使用HPLC级的溶剂和试剂含有缓冲盐和非HPLC级的流动相一定要通过0.45μm的过滤器以除去其中的微粒物质。改变流动相时应防止交叉污染，陈旧的流动相和用久了的试剂瓶应定期废弃，防止生长微生物和组分改变。贮器内壁定期清洗，里面的附件要经常更换。
4.9.2. 泵
泵的密封圈是最易磨损的部件，密封垫圈的损坏可引起系统的许多故障。采取下列措施可以延长垫圈的寿命：
A 每天要把泵中的缓冲液体洗干净，防止盐沉积，泵要浸在无缓冲液的溶液或有机溶剂中；
B 用HPLC级试剂；
C 用烧结不锈钢沉子。要注意防止因泵阻塞造成压力过高而损坏柱塞杆或烧坏电机。
4.9.3. 进样器
�；笠萌芗脸逑锤删唤髂诓辛舻难泛突撼逖�，防止无机盐沉积和样品微粒造成阀转子面磨损或阻塞，严禁用气相色谱那样的尖针头进样。
4.9.4. 色谱柱
防止柱性能下降有以下几方面的措施：
A 溶剂的化学腐蚀不能太强；
B 避免微粒在柱头沉降；
C 泵上要装压力限制器，防止压力过高冲击大；
D 流动相pH>7时用大粒度同种填料作预柱；
E 柱头加烧结片不锈钢滤片，需要时加�；ぶ�；
4.9.5. 检测器
要保持检测器清洁，每天用后连同色谱柱柱一起冲洗。提倡不定期用强溶剂
反向冲洗检测池（拆开柱）。用脱过气的流动相，防止空气泡卡在池内。检测器灯有一定的寿命，不用时不要打开灯。
5.0. 当仪器出现故障时应及时与厂家联系，使用人员不得擅自拆开维修。
5.1. 使用人员应经过培训的且熟练操作仪器，每次使用应进行使用登记。
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